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甜瓜病害鉴定：甜瓜病毒病(Melon virus disease) |
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来源：寿光农业信息网 |
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又叫花叶病，小叶病。春季大棚栽培一般发生在生长后期，但草莓后茬栽培如不注意蚜虫防治，前期容易感染病毒，影响产量。
1、症状
厚皮甜瓜感染病毒后产生的症状，常因品种、植株的生育阶段、环境条件和病毒株系不同而发生很大的变化。主要有花叶、黄化皱缩及两种复合侵染混合型。花叶型新叶产生褪绿斑点，叶片上出现黄绿镶嵌花斑，叶面凹凸不平。新叶畸形、变小，植株端节间缩短，植株矮化，发病愈早，对产量和品质影响愈大。黄化皱缩型新叶狭长，皱缩扭曲，花器不发育，难于坐果，即使坐果也发育不良，易形成畸形果。果实受害时，果实表面形成浓绿色与淡绿色相间的斑驳，并有不规则突起。
2、发病规律
主要是由西瓜花叶病毒和甜瓜花叶病毒侵染所致。传播途径分三种情况：一是种子带毒；二是汁液摩擦传毒，在整枝、打杈、摘心等农事活动中，将病株汁液传给无病植株；三是昆虫传染，以蚜虫传毒率最高。高温、干旱、强光是发病的主要条件，表现症状的适宜温度是18-26℃，温度超过36℃呈现隐症现象。开花前感病，有可能不结果或形成畸形果；坐果期感病，果实品质明显下降；后期感病，则受害较轻。干旱年份蚜虫发生早、数量多，或靠近毒源植物均会导致发病。
3、防治方法
①瓜地选择远离蔬菜作物，减少传毒机会。
②播前进行种子处理，用55℃温开水浸种10分钟，杀死种子表面的病毒。
③加强田间管理，培育健壮植株，增强植株抵抗力。发现病株，及时拔除销毁。
④消灭蚜虫，可选用10%一遍净2000-3000倍液、1%杀虫素2500倍液、40%乐果乳剂800倍液喷洒瓜田及周围杂草，彻底消灭蚜虫。大棚栽培的厚皮甜瓜也可用烟熏剂在敌敌畏原液中浸透1/3只，傍晚时密闭棚膜，进行熏烟灭蚜，省工高效。
以上两张图片来自：http://www.qingfaseed.com |
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瓜类作物病毒病的研究进展
马光恕、廉华 来源：北京农业信息网
现在世界上已知的植物病毒（包括类病毒）有1目10科47属850余种。各种作物几乎都发生病毒病。蔬菜作物中以茄科、葫芦科、豆科、十字花科等受害较重，感染病毒的种类也较多。其中以南瓜发病最重，甜瓜次之，另外黄瓜、西瓜、丝瓜等作物也都不同程度地感染病毒病。
一、侵染瓜类作物的病毒种类及其分布：
目前，已经报道的在自然条件下从瓜类作物上分离和鉴定的病毒有如下28种：西瓜花叶病毒1号（Watermelon
Mosaic Virusl，WMV-1）、西瓜花叶病毒2号（Watermelon Mosaic
Virus2，WMV-2）、黄瓜花叶病毒（Cucumber Mosaic Virus，CMV）、南瓜花叶病毒（Squash
Mosaic Virus，SqMV）、绿皮南瓜黄色花叶病毒（Zucchini yellow Mosaic
Virus，ZYMV）、烟草花叶病毒（Tobacco Mosaic Virus，TNV）、甜瓜坏死病毒（Melon
Necrosis Virus，MNV）、甜瓜叶脉坏死病毒（Melon Vein Necrosis Virus，MVNV）、烟草坏死病毒（Tobacco
Necrosis Virus，TNV）、南瓜卷叶病毒（Squash Leaf Curl Virus，SLCV）、黄瓜绿斑花叶病毒（Cucumber
Green Mottle Mosaic Virus，CGMMV）、番木瓜环斑病毒（Papaya RingSpot
Virus，PRSV）、甜瓜斑点病毒（Melon Necrosis Spot Virus，MNSV）、黄瓜坏死病毒（Cucumber
Necrosis Virus，CNV）、黄瓜叶脉坏死病毒（Cucumber Vein Necrosis
Virus，CVNV）、黄瓜广泛花叶病毒（Cucumber Wide Mosaic Virus，CWMV）、黄瓜矮化斑驳病毒（Cucumber
Stunt Mottle Virus，CSMV）、南瓜潜隐病毒（Cucurbit Latent Virus CLV）、绿皮黄斑病毒（Zucchini
yellow Fleck Virus，ZYFV）、莴苣传染性黄化病毒（Lettuce Infection Yellow
Virus，LIYV）、烟草环斑病毒（TobaccoRing Spot Virus，TRSV）、番茄轮纹病毒（TomatoRing
Spot Virus，TomRSV）、番茄斑点萎蔫病毒（Tomato Spotted Wilt Virus，TSWV）、甜瓜黄矮病毒（Watermelon
Carly Mottle Virus，WCMV）、甜瓜花叶病毒（Melon Mosaic Virus，MMV）、菜豆黄色花叶病毒（Bean
Yellow Mosaic Virus，BYMV）、三叶草黄脉病毒（Clover Yellow Vein
Virus，CYVV）。
1981年，意大利及法国科研工作者鉴别出矮蔓西葫芦黄色花叶病毒（ZYMV）是侵染瓜类的一种新病毒，随后在美国及五大州的其它17个国家均发现此种病毒，常常引起毁灭性流行病。中文名称“矮蔓西葫芦黄色花叶病毒”不被主述28种病毒所包括，但作者分析，它可能同上述提到的“绿皮南瓜黄色花叶病毒”为同一种病毒，因为其英文缩略均为ZYMV。
目前，我国在自然条件下从瓜类作物上分离和鉴定出的瓜类作物的主要病毒有：WMV-2，CMV，SpMV，TMV，MNV，MVNV，TRSVT和MMV等8种。其中危害最严重的是前3种，即WMV-2，CMV和SpMV。
Hseu S.H.等（1987）在我国台湾葫芦科的6种作物上，在自然条件下分离出5种病毒：ZYMV，WMV-1，WMV-2，CGMMV和ZYMV。
在美国，对葫芦科作物带来明显经济损失的病毒至少有7种：ZYMV，WMV-1，WMV-2，CMV，SpMV，SLCV和LIYV。
在日本，侵染西瓜的病毒已经报道的有WMV，CGMMV，CMV和TSWV。其中TSWV是1982年发现的，Iwaki
M.等在1984年报道的，它能引起西瓜银斑病。
在法国，危害葫芦科作物的病毒主要有：WMV-2，PRSV，ZYMV，CMV，ZYFV和MNV。危害最严重的是PRSV，WMV-2，ZYMV。
在已经报道的28种瓜类作物的病毒中，WMV-2，CMV，SpMV是世界性病毒，遍布各瓜灰作物生产地。MNSV，TSWV，CWMV，CLV和MMV等则只限于少数国家或地区。
现已报道侵染甜瓜的病毒种类有：
西瓜花叶病毒2号（WMV-2），属于马铃薯Y病毒组；黄瓜花叶病毒（CMV），属于黄瓜花叶病毒组；甜瓜坏死斑病毒（MNSV），恪
地烟草坏死病毒组；南瓜花叶病毒（SqMV），属于豇豆花叶病毒组。
此外还有：甜瓜花叶病毒（MMV）、黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）、白兰瓜花叶病毒（DPMV）、西瓜叶脉坏死病毒（MVNV）、番木瓜花叶病毒（PMV）、西瓜花叶病毒1号（WMV-1）、秋黄瓜花叶病毒（ACMV）等。同时，有报道说：美国加州莫内里尔谷的甜瓜病毒病的主要病源为WMV-2和SqMV（1981）。在黑龙江省，还未见有甜瓜病毒的病毒毒源种类的报道。但在西瓜上，姜华等经研究鉴定，得知黑龙江西瓜上病毒分离物均系WMV-2。
二、常见瓜类病毒病的危害情况：
瓜类病毒病种类繁多，现仅就最常见的几种病毒病的危害情况介绍如下：
1.西瓜病毒病（WMV-2）。又叫花叶病、小叶病等，是西瓜生产中普遍发生的一种病毒病害，全国各地区均有发生。北方瓜区以花叶型病毒病为主，南方瓜区以蕨叶型病毒病发生较普遍，尤以秋西瓜受害最重。WMV-2的寄主植物主要是葫芦科、豆科、藜科、锦葵科等植物，以瓜蚜、桃蚜、萝卜蚜、麦二叉蚜等传毒和接触传染。西瓜受害后，叶片变小，生长缓慢，植株矮化，花器发育不良，严重的不能座果，或座果后发育不良，畸形，果小，产量低，品质差，失去商品价值。
2.黄瓜病毒病（CMV）。主要在夏、秋黄瓜和秋棚黄瓜上发生，属于全国性病害。CMV寄生范围广，可侵染45科124种植物，主要以瓜蚜、桃蚜等传毒。黄瓜受害后，新叶上产生黄色斑纹，叶片不舒展，随叶片展开黄色斑纹明显，叶缘向下卷曲，叶片小。严重病株从下部叶黄枯，有些品种老叶产生许多黄色坏死斑。瓜条发病，果面出现凹凸不平的浓绿与浅绿的斑驳。
3.南瓜病毒病（SqMV）。属于全国性病害，露地西葫芦最易感染这种病害。南瓜、西葫芦上发生病毒病的种类很多，除SqMV外，WMV、CMV、MMV及TMV也是常发性病毒，其中WMV的症状表现较重，植株矮化，叶脉带绿，叶片畸形，花叶明显，绿色部分往往突起。果实产生黄绿斑驳和疣状。发病早，植株矮缩。MMV症状较重，表现系统花叶或褪绿斑驳，叶面出现深绿凸起疱斑，叶脉皱曲，茎节缩短。病瓜表面凹凸不平，或有疣状突起。在田间，一般是几种病毒复合侵染，表现出复杂的症状。
4.甜瓜病毒病（MMV）。又称花叶病，小叶病，是我国各甜瓜产区普遍发生的一种病害，保护地、露地均发生，在西北干旱地区发生严重，对当地哈蜜瓜的产量和品质影响很大。感病的甜瓜植株发育不良，座瓜率和产量降低，含糖量下降，瓜的品质低劣，经济效益大受影响。为害甜瓜的病毒种类很多，田间往往是CMV、WMV-2、MMV、SqMV、MNV、MVN-V、MMV混合感染而成，其症状复杂。近些年，以哈蜜瓜为代表的厚皮甜瓜种植区域由西向东、向北扩大，在华北、华江、东北的保护地内均有存皮甜瓜的种植，造成一睚以种子带毒的甜瓜病毒病的扩大传播。MMV的寄主范围较窄，只能侵染葫芦科植物，在田间主要靠瓜蚜、桃蚜和接触传毒。
三、有关瓜类上病毒株系的研究：
在瓜类病毒上，研究最多的是CMV，因其寄主范围极其广泛，能侵染86科775种植物，是寄主植物最多、分布最广、最具经济重要性的植物病毒之一。CMV是雀麦花叶病科（Bormoviridae）、黄瓜花叶病毒属（Cucumovirus）的典型成员。世界各地已经报道了100多个CMV株系或分离物，它们在血清型上分为两大类一亚组Ⅰ和亚组Ⅱ。以分离物DTL为代表的亚组Ⅰ主要分布于热带和亚热带；以分离物ToRs为代表的亚组Ⅱ流行于温带地区。如C.Varveri和K.boutsika(1999)研究了希腊的40个CMV分离物，发现所有被测CMV分离物属于亚组Ⅰ或属于DTL血清组；徐平东等研究了西番莲上的CMV的特点，所测的5个CMV分离物，4个属于CMV亚组Ⅰ，1个属于CMV亚组Ⅱ，稍早一些，徐平东（1997）还研究了来自南京、广东、江苏、辽宁、厦门、福建、漳州等地的不同作物上的16个CMV分离物及4个标准毒株Fny、Lny、M、WL，发现14个分离物及标准毒株Fny、M属亚组ⅠDPL血清组，2个分离物及标准毒株Lny、WL属亚组ⅡToRs血清组。标准毒株Fny、M属DTL血清组，Lny、WL属ToRs血清组，与文献报道相一致。徐平东通过研究发现茄科的心叶烟、普通烟（cv.Xanthi-NC）能区分两亚组的分离物，与国外报道相一致，同时也发现葫芦科的西葫芦能作为亚组鉴定的指示植物，这在文献上尚未见报道。
四、瓜类作物病毒病的检测技术：
近年来，病毒检测技术进展很快，尤其是血清学和现代生物技术的不断应用和发展，对病毒的检测达到了高度的专化性和极高的灵敏度。
1.生物学测定。生物学测定是利用病毒的寄主范围和不同寄主表现的症状差异来进行的一种
病毒鉴定方法。这需要了解不同种病毒的鉴别寄主，同时还要求找到局部枯斑寄主，有助于病毒的分离和定量测试。瓜类作物病毒病的鉴别寄主一般采用的是葫芦科、茄科、豆科、藜科、苋科等5科的一些种。这些种都对一定的瓜类病毒表现很好的局部枯斑反应，如CMV的鉴别寄主可以采用黄瓜、烟草、番茄、菜豆、豇豆、茴藜和苋色藜等。生物学反应是采用最多的病毒病鉴定的方法，但存在不稳定性和工作量大等缺点。
2.电镜观察。电镜观察也是一种常规的病毒检测的方法，但应该注意只有能用摩擦接种和蚜虫能够非持久性传播的病毒才易在电镜下观察到，对于蚜虫持久性传播的病毒很难在电镜下检测到。
3.血清学反应。近年来，血清学技术发展很快，除了琼脂双扩散、微量凝集法，对流免疫法以及酶联免疫法外，还发展了一些新的血清学方法，如采用致敏抗体（A蛋白）代替常规抗血清所形成的微量凝聚法，灵敏度有了很大提高。徐平东成功地用A蛋白夹心ELISA（PAS-ELISA）进行了CMV的鉴定，并利用单、多克隆抗体双夹心ELISA（DAS-ELISA）进行了CMV亚组的鉴定。孟清等用斑点免疫杂交法（DOT-ELISA）检测了马铃薯卷叶病毒。马占鸿等用DOT-ELISA进行了玉米花粉中玉米矮花叶病毒的检测。DOT-ELISA是以硝酸纤维素膜（NCM）为固相载体，对蛋白质有高度的亲应过程中存在有“泄漏”和“非吸附”现象。因此，斑点免疫杂交法（间接ELISA）比双抗体夹心ELISA（DAS-ELISA）检测的灵敏度至少提高了8倍。
4.内含体的鉴定。植物病毒内含体是病毒侵染寄主细胞后，细胞内形成的特殊结构。特种病毒诱发的内含体在一定的寄主落围内具有特定表现。在电镜睛发现一种内含体由病毒粒子组成，光镜下内含体可能确定是病毒聚集体或晶体。内含体的性状主要取决于病毒，受寄主的影响很小。因此，对病毒内含体的检查有定的诊断和鉴定作用，特别是对于那些在细胞内形成特殊的内含体病毒，是一种快速的诊断和鉴定方法。Yell.S.D等（1984）对马铃薯Y病毒组的番木瓜环斑病毒（PRSV）和西瓜花叶病毒1号（WMV-1）所产生的内含体进行了分析，得出它们的紫外线吸收光谱是典型的蛋白质吸收光谱，分子量都为70000，且没有血清区别。但是它们都与WMV-2和其它供试的马铃薯Y病毒组成员的CIPS无血清学关系，表明了两者的近源性（PRSV和WMV-1的最大区别是前者能够分侵染番木瓜，而后者不能）。
5.衣壳蛋白的鉴定。病毒的衣壳蛋白是由病毒DNA或RNA翻译编码的，不同的病毒其衣壳蛋白也存在差异。Yell.S.D等（1984）在研究了PRSV与WNV-1通过内含体不能区别的同时，对它们的衣壳蛋白进行了血清学研究，发现它们的衣壳蛋白无血清学关系，从而肯定了PRSV与WMV-1虽近源，但是它们是马铃薯病毒组的两个不同成员。
同时利用衣壳蛋白亚基分子量的不同也可以进行鉴定。田国志和裘维藩（1989）对葫芦科作物上的3种主要病毒（WMV、CMV、SqMV）衣壳蛋白进行了SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）分析，准确、快速地诊断了我国瓜类作物上的3种主要病毒。另外，刘勇等成功地用CMV外壳蛋白基因探针检测了提纯的病毒及植物组织的病毒。
6.核酸杂交和核酸序列分析。病毒检测和株系的区分也能借助于cDNA探针。cDNA探针可能通过病毒RNA的直接反灵来制备，也可首先将所得的cDNA克隆化，然后通过其缺刻翻译来产生cDNA探针，应用于各种检验，包括Southern和Northern杂交、液体杂交及点杂交等。用cDNA探针可检测到类病毒、卫星RNA以及不能形成病毒质粒蛋白的病毒分离物。
徐平东、周仲驹等首次测定了我国分离的CMV亚组Ⅱ分离物的CP基因序列，从分子水平上证实了在我国存在CMV两个亚组分离物。
7.PCR检测。聚合酶链反应（Polymerase ChainReaction）又称无分子克隆系统或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增法，是Saiki和Mullis等人于1985年首创的一种DNA体外扩增技术。利用该法可将极微量的靶DNA片段在4h左右特异性地扩增上百万倍，从而大大提高对DNA分子的分析和检测能力，理论上可以检测到单分子DNA样品。Simon
A.Langeveld等（1991）应用PCR技术成功地鉴定了一种从Gloriosa roth childiana上分离到的病毒为马铃薯Y组病毒。马占鸿等在检测玉米花粉中玉米矮花叶病毒时，在DOT-ELISA检测的基础上进一步采用反转录—聚合酶链反应法（RT-PCR）进行了检测。没有检测到玉米矮花叶病毒，说明在受玉米矮花叶病毒侵染的玉米植株中，花粉并不带毒。
PCR技术具有快速、简便、灵敏度高、所需样品少和特异性强等特点，在样品量极少或病毒在组织中含量很低时，用血清学方法检测有困难，而用PCR方法则会获得理想的效果。 |